Phosphatase alcaline de rat (ALPE) ELISA Kit

Utilisation prévue

Ce kit est utilisé pour évaluer la phosphatase alcaline ((ALP) dans l'échantillon du sérum, du plasma sanguin et d'autres tissus connexes du rat.

Principe de l'essai

Le kit utilise un test d'immunosorbent lié à l'enzyme (ELISA) à double anticorps sandwich pour évaluer le niveau de phosphatase alcaline ((ALP) chez le rat dans les échantillons.Ajouter de la phosphatase alcaline ((ALP) à l'anticorps monoclonal Enzyme well qui est pré-enduit de phosphatase alcaline ((ALP) du rat anticorps monoclonal, l'incubation; ensuite, ajouter des anticorps phosphatase alcaline (ALP) étiquetés avec de la biotine, et combinés avec Streptavidin-HRP pour former un complexe immunitaire;ensuite effectuer l'incubation et le lavage à nouveau pour enlever l'enzyme non combinéePuis ajouter la solution de chromogène A, B, la couleur du liquide change en bleu, et à l'effet de l'acide, la couleur devient enfin jaune.Le chromat de la couleur et la concentration de phosphatase alcaline (ALP) de l'échantillon ont été positivement corrélés..

Matériaux fournis dans le kit d'essai

Matériaux requis mais non fournis

1. incubateur à 37 °C

2Lecteur d' enzymes standard

3- Pipettes de précision et tuyaux jetables

4. de l'eau distillée

5. Tubes jetables pour diluer l'échantillon

6. papier absorbant

Notes importantes

1Si les plaques enduites d'Enzyme n'ont pas été utilisées après ouverture, la batterie doit être placée dans un endroit où la température ambiante n'est pas suffisante.les autres plaques doivent être conservées dans un sac scellé.

2Pour chaque étape, ajouter l'échantillon avec l'injecteur d'échantillon qui doit être calibré fréquemment, afin d'éviter des tolérances expérimentales inutiles.

3. l'opération doit être effectuée conformément aux instructions strictement et les résultats des essais doivent être basés sur les relevés du lecteur d'enzymes.

4Pour éviter la contamination croisée, il est interdit de réutiliser la tête d'aspiration et la membrane de la plaque d'étanchéité dans vos mains.

5. Tous les échantillons, le tampon de lavage et chaque type de rejet doivent être selon le procédé du matériau infectieux.

6. Les agents inactifs doivent être placés ou recouverts. Ne pas utiliser le réactif avec des lots différents. Et les utiliser avant la date de péremption.

7Le substrat B est sensible à la lumière, une exposition prolongée à la lumière est interdite.

Méthode de lavage

Méthode de lavage manuel:secouez le liquide restant dans les plaques enzymatiques, placez des feuilles de papier sur le banc d'essai et battez fortement les plaques à l'envers.35 ml de solution de lavage après dilution dans le puitsRépétez ce processus selon vos besoins.

Méthode de lavage automatique:s'il existe une machine à laver automatique, elle ne doit être utilisée dans l'essai que lorsque vous connaissez parfaitement sa fonction et ses performances.

Précision

Précision à l'intérieur de l'essai: 3 échantillons présentant des taux d'ALP faibles, moyens et élevés chez le rat ont été testés 20 fois sur une seule plaque, respectivement.

Précision entre les essais: 3 échantillons présentant un niveau faible, moyen et élevé d'ALP chez le rat ont été testés sur 3 plaques différentes, 8 réplications dans chaque plaque.

CV ((%) = SD/moyenneX100

Le taux de dépistage de la maladie est supérieur à 10%.

Inter-analyse: CV< 12%

Exigences relatives aux échantillons

1. Impossible de détecter l'échantillon contenant du NaN3, car le NaN3 inhibe l'activité du HRP.

2. extraire le plus tôt possible après la collecte des spécimens et selon la littérature pertinente, et doit être expérimenté le plus tôt possible après l'extraction.l'échantillon peut être conservé à -20 °C pour préserverÉvitez les cycles de congélation et de décongélation répétés.

3. sérum- coagulation à température ambiante 10-20 min, centrifugation 20 min à la vitesse de 2000-3000 tours/min. éliminer le supernatant, si des précipitations sont apparues, centrifugez à nouveau.

4- utilisation plasmatique appropriée EDTA ou plasma citrate comme anticoagulant, mélangez pendant 10 à 20 min, centrifugez pendant 20 min à une vitesse de 2000 à 3000 tr/min. Retirez le supernatant, si des précipitations apparaissent, centrifugez à nouveau.

5. collecte d'urine dans un récipient stérile, centrifugation 20 min à la vitesse de 2000-3000 r.p.m. enlever le surnaturant, si des précipitations sont apparues, centrifugez à nouveau.L'opération de l'hydrothorax et du liquide céphalo-rachidien.

6- culture cellulaire - détection des composants sécrétoires, collecte dans un récipient stérile, centrifugation 20 min à une vitesse de 2000 à 3000 tr/min.Suspension de cellule diluée avec PBS ((PH7).2-7.4), la concentration cellulaire atteint 1 million / ml, cycles de congélation-dégel répétés, dommages aux cellules et libération de composants intracellulaires, centrifugation 20 min à une vitesse de 2000-3000 tr/min.éliminer le surnaturantSi des précipitations apparaissent, centrifugez à nouveau.

7.échantillons de tissus- Après coupure des échantillons, vérifier le poids, ajouter du PBS ((PH7.2-7.4), congeler rapidement avec de l'azote liquide, maintenir les échantillons à 2-8°C après fusion, ajouter du PBS ((PH7.4),Homogénéisés à la main ou à la meuleuse, centrifugez pendant 20 min à une vitesse de 2000-3000 tr/h pour enlever le surnaturant.